تحقیق درباره تأثیرآنتی اسپرم آنتی بادی های اندازه گیری شده به روش واکنش آگلوتیناسیون مختلط مستقیم بر درصد لقاح آزمایشگاهی

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 9

تأثیرآنتی اسپرم آنتی بادی های اندازه گیری شده به روش واکنش آگلوتیناسیون مختلط مستقیم بر درصد لقاح آزمایشگاهی

مقدمه

اگر چه برخی محققین بر شیوع آنتی اسپرم آنتی بادی (ASA)1 در بیماران نابارور تأکید داشته اند (1)؛ ولی برخی دیگر ASA را در درصد نسبتاً بالایی از مردان و زنان بارور و نابارور مشخص کرده اند (2). با وجود این مطالعات انجام شده در سیستم های حیوانی و انسانی نشان داده است که وجود آنتی اسپرم آنتی بادی ها ممکن است با باروری تداخل نماید. ASA بر سطح اسپرم و در ترشحات تناسلی در پاتوژنز ناباروری دخیل است، در صورتی که اهمیت بالینی ASA سرم بحث انگیز است. شیوع ASA در زوج های نابارور 36-9 درصد و در جمعیت مردان نابارور 21-8 درصد است (3). ASA اثرات متنوعی روی باروری انسان دارد که از آن جمله می توان معیوب کردن حرکت پیش رونده اسپرم (4،5)، محبوس کردن و فاگوسیتوز اسپرم در موکوس سرویکس، کاهش اتصال و نفوذ اسپرم به زوناپلوسیدا، مهار ظرفیت پذیری و واکنش آکروزومی و مهار ادغام اسپرم – تخمک (5،6) را نام برد.

بنابراین وجود ASA به عنوان عامل ایمونولوژیک، یکی از علل اصلی ناباروری مردان در نظر گرفته می شود. استفاده از فن آوری کمک باروری در بیشتر زوج های دارای ASA مفید است؛ زیرا عیب اتصال و ادغام گامت ها را به حداقل می رساند. به همین علت لقاح آزمایشگاهی به عنوان ابزاری برای درمان ناباروری ایمنولوژیک استفاده شده است (7). با وجود این، آنتی اسپرم آنتی بادی ها می توانند در موارد ذیل با IVF2 نیز تداخل نمایند :

اتصال و نفوذ اسپرم به زوناپلوسیدا؛ واکنش زونا؛ ادغام اسپرم، تخمک؛ تسهیم و گسترش اولیه جنینی (8).

امروزه تعیین ASA یکی از مهم ترین مراحل در ارزیابی ناباروری مردان است.آنتی اسپرم آنتی بادی ها از طریق آزمایش های متعددی تعیین می شوند. بیشتر مطالعات استفاده از روش MAR3 را برای ارزیابی وجود ASA و ایزوتیپ آن تأیید می نمایند (9). در این روش گلبول های قرمز Rh مثبت گروه خونی O با IgA یا IgG انسانی پوشیده می شوند و سپس با اسپرم های متحرک شسته شده یا شسته نشده مخلوط می گردند. در ادامه آنتی سرم اختصاصی علیه ایمونوگلوبولین اضافه می شود و آگلوتیناسیون اریتروسیت – اسپرم در حضور ASA رخ می دهد. این آگلوتیناسیون سپس به طور نیمه کمی با میکروسکوپ نوری تعیین می گردد (10). درکیت های تجاری با نام Sperm Mar Test به جای گلبول های قرمز از ذرات لاتکس استفاده شده است. این کیت ها توانایی تعیین هر سه کلاس ASA (4،5،6) را دارا است (11).

لذا در این مطالعه وجود ASA از کلاس IgA و IgG در مردان زوج های نابارور کاندید IVF به روش MAR مستقیم مشخص گردید و اهمیت بالینی ایزوتیپ های IgA و IgG در پیشگویی درصد لقاح بررسی شد.

مواد و روشها

تهیه نمونه های سمن : نمونه های سمن از مردان 80 زوج نابارور کاندید IVF مراجعه کننده به مرکز باروری و ناباروری اصفهان بین مهرماه 1380 تا فروردین ماه 1381 به دست آمدند. این نمونه ها 72-48 ساعت پس از آخرین مقاربت، معمولاً به کمک همسر، بدون زناشویی و بدون استفاده از لوبریکانت جمع آوری گردید (12).مردان تحت بررسی از نظر حرکت، تعداد و ریخت شناسی اسپرم طبیعی بودند و همسران آنها آندومتریوز و اووسیت های نامناسب نداشتند. زوج هایی که پارامترهای سمن ضعیف داشتند (به خصوص از نظر حرکت و ریخت شناسی) به جای IVF تحت عمل ICSI قرار گرفتند و از مطالعه حذف شدند.

آزمایش MAR مستقیم: برای تعیینASA ازکلاس IgA از کیت Sperm Mar Test IgA محصول Fertipro کشور بلژیک استفاده گردید. Ml10 سمن تازه روی یک لام ریخته شد و ml10 معرف لاتکس به آن اضافه گردید. پس از مخلوط کردن و قرار گرفتن2-3 دقیقه زیر میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی X400، اسپرم های متحرک چسبیده به ذرات لاتکس تا 100 اسپرم شمارش گردید و نتیجه بصورت درصد گزارش شد. نتیجه بزرگ تر یا مساوی 10% مثبت تلقی گردید. جهت تعیین ASA از کلاس IgG از کیت Sperm mar test IgG(محصول Fertipro کشور بلژیک) استفاده شد. Ml10 سمن تازه روی یک لام ریخته شد و Ml10 معرف لاتکس به آن اضافه شد. پس از مخلوط کردن، Ml10 آنتی سرم اختصاصی علیه قطعهFC، IgG انسانی اضافه شد. با قرار دادن لامل بعد از 2-3 دقیقه زیر میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی X400 اسپرم های متحرک چسبیده به ذرات لاتکس در 100 اسپرم شمارش گردید و نتیجه به صورت درصد گزارش شد. نتیجه بزرگ تر یا مساوی 10% مثبت تلقی گردید (13،11).

پروتکل IVF : رشد فولیکول های تخمدان در همسر بیماران با استفاده از آگونیست های GnRH، hMG تحریک شدند. سپس وضعیت رشد فولیکول ها با اولتراسونوگرافی ارزیابی شد و با تجویز hCG به میزان IU10000 تخمک گذاری القا گردید. پس از 32-36 ساعت اووسیت ها از طریق تخلیه فولیکول جمع آوری شد.

پس از شستشو در HSA1 10%+ Ham’sF10، اووسیت ها به محیط کشت (Vitrolife-Goteberg-Sweden) IVF-20 منتقل شدند.

پس از 2 ساعت تعداد 100000-50000 اسپرم متحرک که به روش Pure Sperm آماده شده بود در مجاور هر اووسیت قرار گرفت. بعد از گذشت 19-17 ساعت وجود لقاح با توجه به تشکیل پرونوکلئوس ها ارزیابی و درصد لقاح ثبت شد (14).زوج ها با درصد لقاح 50% در گروه با درصد لقاح پایین و زوج ها با درصد لقاح < 50% در گروه با درصد لقاح بالا قرار گرفتند.

تحلیل آماری: اطلاعات جمع آوری شده با نرم افزار آماری SPSS تحلیل قرار گردید. برای تعیین وابستگی دو متغیر از آزمون X2 برای مقایسه میانگین ها از t-test و برای تعیین ضریب همبستگی از آزمون همبستگی پیرسون استفاده گردید.

یافته ها.

پس از ثبت نتایج IVF براساس درصد لقاح، 28 زوج (35%) در گروه با درصد لقاح پایین و 52 زوج (65%) در گروه با درصد لقاح بالا قرار گرفتند.

ASA از کلاس IgA به روش MAR مستقیم، در گروه با درصد لقاح آزمایشگاهی پایین، در 10 زوج (36%) منفی و در 18 زوج (64%) مثبت گردید. در حالی که، در گروه با درصد لقاح آزمایشگاهی بالا در 46 زوج (88%) منفی و در 6 زوج (12%) مثبت شد. آزمون 2 ( نشان می دهد که درصد موارد مثبت در گروه با درصد لقاح پایین نسبت به گروه با درصد لقاح بالا تفاوت دارد (001/0 P<) (جدول1).

جدول 1- مقایسه سطح ASA از کلاس IgA به روش MAR مستقیم در گروه با درصد لقاح پایین و گروه با درصد لقاح بالا

سطح ASA

زوج ها

Direct – MAR-IgA

کل

10% <

10%

تعداد زوج های نابارور با درصد لقاح پایین

10

18

28

تعداد زوج های نابارور با درصد لقاح بالا

46

6

52

کل

56

24

80

001/0p<

.

میانگین (انحراف معیار) سطح ASA از کلاس IgA به روش MAR مستقیم، در گروه با درصد لقاح آزمایشگاهی پایین (29/036/0) و در گروه با درصد لقاح آزمایشگاهی بالا،